1.FIDA仪器实验

FIDA原理:

FIDA技术基于抛物线流体流动剖面的分散分析。注入样品区的指示剂(indicator)的分散性取决于流道尺寸、流速和指示剂的表观扩散系数。专用的Fidabio仪器和软件可以精确量化不同环境下指示剂的表观扩散率。特别地,可以量化与分析物(例如基于抗体的药物)的相互作用。原理如下图所示。

实验项目

序号名称主要检测内容 
1
双特异性抗体表征
标记抗原的粒径,标记抗原和抗体复合物的粒径,三元复合物的粒径,抗体与两种抗原分别的kD值,三元结合的协同性系数
2分子胶的表征标记蛋白的粒径,标记蛋白和分子胶复合物的粒径,三元复合物的粒径,分子胶与两种抗原分别的kD值,三元结合的协同性系数
3PROTAC的表征标记蛋白的粒径,标记蛋白和PROTAC复合物的粒径,三元复合物的粒径,PROTAC与靶蛋白和E3酶分别的kD值,三元结合的协同性系数
4生物分子相互作用(二元)生物分子的粒径,形成复合物后的粒径及二元结合的kD值 
5LLPS(液-液相分离)体外定量表征体外条件下,定量检测发生LLPS前后溶液内蛋白浓度,及发生LLPS后的droplet的数量及大小分布
6AAV的表征AAV大小(Rh),聚集程度,多分散性指数(PDI) 
7IgG定量对未知出样品中的IgG进行定量
8表征蛋白的结构完整性和稳定性 蛋白的粒径,蛋白粒径随温度/变性剂/其他变性条件处理后粒径的变化,聚集状态。
9膜蛋白去垢剂筛选筛选用于溶解特定膜蛋白的最佳去垢剂组合

2.Fortebio Octet 仪器实验

ForteBio Octet®  分子间相互作用检测系统是由 ForteBio 公司生产的全自动测试平台,可用于测量蛋白质与生物分子之间的相互作用。该系统基于生物膜层光学干涉(BLI)技术,只需无需标记,微量样本,可提供生物分子相互作用的实时分析结果。Octet® RED96 系统在蛋白质分析方面的出色表现能够加快和简化您的科研与生产流程。

 ● 原理:应用生物膜层光学干涉(Bio-Layer Interferometry ,BLI)

技术,当两列或几列光波在空间相遇时,会进行叠加,这种现象称为光的干涉。ForteBio Octet® 仪器就是利用了光的干涉现象。ForteBio Octet® 仪器内部有生物传感器,生物传感器底端由生物膜层覆盖,生物膜层可结合并固定生物分子。当具有一定带宽的可见光垂直入射生物膜层时,光在生物膜层的两个界面反射后形成一定波长的干涉波。当固定分子与溶液中分子发生相互作用时,生物膜层厚度增加,干涉光谱曲线向波长增加的方向移动,光波相位移动由工作站实时探测,对光波的相位移动进行分析便可定量得出传感器表面分子数量变化及相关浓度与动力学数据。

 ● ForteBio Octet® 检测范围 可检测的样品包括:蛋白与蛋白,蛋白与小分子,抗原与抗体,蛋白和抗体 Fab 片段,DNA 与 DNA 可测定的数据包括:判断分子间有无亲和力;测得判断分子间亲和力及解离速率数据,包括结合常数,解离常数和亲和常数。

应用优势:

  • 动力学数据实时测定:可实时检测分子间相互作用动力学数据,可实现对分子间瞬时相互作用的检测。
  • 更高的通量、更快的实验流程:8~16 个样品同时检测,是非标记技术中通量最高的;15~30 分钟可以完成 96 个样品的分析
  • 更宽的应用范围:直接检测粗制的样品,甚至是样品中存在不溶解的成分,耐受各种溶液环境,只有结合到传感器表面的分子才会被检测。病毒颗粒等大分子样品也能得到动力学结果。

实验项目:

1.动力学参数测定

2.相互作用机理研究

3.功能筛选及定性分析

4.抗体和其他蛋白的定量

5.ELSA测定

6.小分子化合物和分子片段筛选……

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