应用VIPS,杨森将细胞系开发所需的时间缩短了一半

导语

自上世纪90年代以来,单抗和疫苗等生物药迅猛发展,在全球市场以约每年10%的复合增长率持续增长,预计到2022年,生 物药将在百强制药企业的销售额中占据惊人的52%。

与传统的小分子药物不同,生物药是在具有相同基因组成的哺 乳动物细胞内生产。为保证产品质量和一致性,并满足监管 要求,杨森研发中心的细胞系开发小组必须证明其细胞系为单克隆细胞系,即来源于一个细胞。

杨森细胞系以往的开发流程

在之前的10年,ClonePix™ 技术是杨森细胞系开发的基石。该四人小组 需要5个月的时间去完成一个项目:先创建约有8,000万个CHO细胞的多个转染pool,然后将其中约800万个细胞人工转移到半固体培养基的培养板中,接着在ClonePix中筛选(用Alexa488 Protein-G)出最好的800到1,200个抗体分泌克隆。

这800到1,200个克隆经过几天的分裂后,转到96孔深孔板中继续增殖;检测抗体滴度,再从中筛选出最好的48个亲本克隆,转入摇瓶中继续扩增 ;分批补料式摇瓶中检测抗体滴度,从中筛选出最好的20个亲本克隆进行亚克隆;重复上述流程:ClonePix筛选,96孔深孔板,第二轮补料式摇瓶,直至筛选出24个细胞系到ambr®250系统上检验(见图1):

ClonePix 方法在克隆源性上存在的问题

  Clonepix

    95%

    FDAMCBFDA

   ClonePix       

Solentim Cell Metric CLD VIPS

   ClonePix使Alexa488 Protein G)

    SolentimCell Metrics CLDCell MetricsTom KellySolentimVIPSVIPS30nl20Z

 VIPSD0

Kelly

VIPS

KellyVIPS

VIPS

  VIPSVIPS8,00015,000 /)使CDCHO

VIPS

    使VIPS87%3VIPSCell MetricsVIPS95%4

    VIPS4,75030.06%Cell Metric VIPS3(LD)10%

    96481429%使VIPSVIPSLD31.9%Kelly5

VIPSLD

VIPS便: 

    

   Day0Day2),VIPS绿 (GFP)(RFP)GFPVIPS (6)

     Kelly :VIPS

VIPS

    VIPSVIPSVIPS Kelly: FDAVIPS

     VIPSpool

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     1096384使