益拼转座酶平台在双抗开发中的独特优势

由往期介绍可知，Leap-In转座酶平台在抗体开发中，有着显而易见的优势：

1. 转座后获得的细胞株，蛋白表达量高；

2. 细胞株的稳定性高，传代和蛋白表达都表现出高稳定性；

3. 高表达细胞株筛选相关工作量急剧降低；

4. 由于mini pool的中生产出的蛋白和pool中高度一致，可以利用mini pool产出的蛋白提前一些实验，因此可缩短开发时间。

本文则简单介绍了在双抗开发中具备的独特优势，若有兴趣请与我们联系了解详情。

首先，在双特异抗体开发中，表达量低是个比较普遍的问题，应用Leap-In转座技术则可以快速获得高产稳定细胞株。

然而，低表达并不是唯一的问题，双特异抗体的正确装配是另一大挑战。众所周知，合适的各链蛋白片段表达比例，是提供正确装配率的关键。传统的方法是需要利用多个质粒载体协同共转，然而在基因的整合和各蛋白片段的表达上，常常都难以控制。

图示：链比例需考量的因素。

Leap-In转座技术，有着载体容量⼤的特点（10kb-20kb），在同一个载体中可以构建多个基因读框，可实现多基因的一次性同步整合到宿主细胞染色体并保持完整性，易于实现对蛋白表达的调控。不仅可以从目的基因着手，来优化或调节mRNA的表达和后续的翻译；在载体上构建不同的基因读框过程中，还可以设计不同的启动子和增强子等或通过其它多种策略，用以调节各基因的不同表达水平，实现调控轻重各链片段不同表达比例的目的。ATUM公司在这些载体设计中积累有非常好的经验，已经成功应用于全球多家知名药企，并有多个IND被全球主要的监管部门批准。

图示：载体设计控制比例，3个读框。

在下图这个Leap-In应用的案例中，一种轻链基因和两种重链基因，同时构建在同一载体中，转座后稳定表达三种蛋白，但是不同的载体构建造成不同的蛋白表达水平，即各种链蛋白不同的比例。

图示：微小的蛋白比例差别，却极大影响正确装配率。

从结果中可以看到，微小的蛋白比例差别，却极大影响后续双特异抗体的正确装配率。由于多种载体构建的尝试，可以轻松筛选出不仅高表达，同时错配率低的理想细胞株。

最近的一个例子，在复宏汉霖公司近期的报道中，应用Leap-In技术开发双特异抗体HX101，“稳定细胞株在纯度、产率和单克隆表达目标产物的比率均有显著提高，目标产物滴度达到了6g/L，表达正确配对产物的细胞株从6%提高到90%，产品相关杂质较少。”