Valita TITER IgG定量试剂盒

Valita™TITLE IgG定量试剂盒是一款具有高通量,耗时短,操作简便,成本低,精确度高等多种优点的蛋白定量方法,能够提高单克隆抗体药物的研发效率。

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分类:

简 介:

单克隆抗体开发的最终目标是找到一个稳定地、高产量和高质量的单克隆抗体的克隆,所以IgG的定量是单克隆抗体开发与生产的各个阶段的关键步骤(图1)。

常用的IgG定量方法需要特殊仪器、熟练人员或耗时的检测,如HPLC、表面干涉法和酶联免疫吸附试验(表1)。在这里,我们介绍Valita™TITER的定量方法,这个实验不到1小时,并可以整合到生物工艺流程中的96孔板格式。该方法通量高,分析过程需要样品体积少,操作简单,无需大量硬件设备的投资。

特 点:

1. 简单获取和分析数据

2. 96孔板不到1小时快速出结果

3. Valita™TITLE IgG精确测定2.5~100 mg/L;
Valita™TITLE Plus IgG精确测定0.1~2 g/L

 

工作流程:

样品的准备遵照试剂盒说明书的相应要求。标准曲线的绘制采用每个相对荧光值对应一个IgG标准品的方法。在Valta™TITER微孔板的每个孔中加入重建缓冲液以及标准品或样品。混匀后避光孵育30分钟。然后在POLARstar Omega、PHERAstar或CLARIOstar多功能酶标仪(BMG LABTECH公司)中,采用预置的检测程序进行读数。在MARS分析软件中将获得的Raw Data转化成.csv格式文件,再用Valita™APP软件进行分析。

 

原 理:

Valita™TITER定量是基于荧光偏振(FP)技术检测IgG与IgG结合肽(ProteinG)的相互作用。96孔板的每一个孔包被荧光标记的Protein G。当把;样品加到孔内,Protein G重悬并结合样品。当Protein G结合到抗体,Protein G的运动变慢, 导致FP值增加。

图2:自由的蛋白 G 分子很小且在缓冲液中快速旋转。结果是偏振激发光丢失了偏振性。当蛋白 G 分子在样品中结合了抗体,较大的复合体旋转就会减慢导致 FP 值的增加 。

 

IgG 不同定量方法相关性比较:

 

总  结:

IgG 定量必须在细胞系开发过程的多个步骤中进行以保证最终扩大化生产的产品质量,因此一种以尽可能少的时间获得最准确结果的测定方法对成功至关重要。ValitaTITER 实验是一种均相的、高通量的方法,可在细胞系开发工作流程中精确快速的检测 IgG 含量。这种实验的96 孔板检测已在 SpectraMax iD5 读板机和其他具有 FP 功能的 MolecularDevices 公司读板机上被充分验证通过,保证结果的可靠性。而 SoftMax Pro 软件则大大减少检测参数的设置时间并自动拟合标准曲线和计算样品浓度。