FIDA部分应用实例展示

IgG定量分析

我们使用荧光标记的Protein G(488-proG)作为Indicator,利用其与IgG结合后,复合物的平均粒径与IgG浓度呈函数关系的特性,通过检测488-proG-IgG复合物的平均粒径,与标准曲线拟合,即可方便地检测IgG的浓度。

本案例中,采用在毛细管中混合样品的进样方式:首先用分析物(Analyte)填充毛细管,随后注入荧光指示剂(Indicator,本实验为488-proG)。当施加压力时,两者在毛细管中混合并相互作用。因此,样品的制备和消耗量显著减少。

蛋白稳定性分析

蛋白质的稳定性会受到变性剂等不稳定因素的影响,因此评估蛋白质稳定性在药物开发中对确保有效性和安全性非常重要。本案例中,进行了在盐酸胍或尿素浓度增加的情况下Protein G的稳定性测试。

(A):

(B):

(A)ProteinG及ProteinG-IgG复合物在不同的盐酸胍浓度下的水化半径变化;(B)ProteinG及ProteinG-IgG复合物在不同的尿素浓度下的水化半径变化

Protein G的水化半径(Rh)随着盐酸胍浓度的变化(0-4M)呈函数关系,如图2A绿线所示。盐酸胍浓度较低时,Protein G水化膜被破坏,Rh略有降低。随着盐酸胍浓度增加,Protein G去折叠,到2.6M左右时,Protein G和IgG不再发生结合,Protein G与Protein G-IgG复合物的Rh相当(图2A红线)。当盐酸胍浓度继续增加,Protein G去折叠导致Rh继续增大。尿素具有与盐酸胍类似的促进蛋白变性的作用,Protein G和Protein G-IgG复合物的Rh在尿素溶液中也有与盐酸胍溶液中类型的效应。

蛋白聚集及颗粒分析

在蛋白分析中,经常需要对蛋白在不同的环境条件下导致的多聚化以及蛋白颗粒物的形成进行统计和评价。使用FIDA可以很容易的进行蛋白多聚化和颗粒物形成的检测,帮助实验人员及早发现蛋白的聚集趋势,优化实验条件。

本案例中,我们采用高温对IgG造成蛋白变性和聚集的作用,FIDA可以很容易地捕获蛋白聚集物的信号,在信号图中以“尖峰”的形式存在,当蛋白聚集物越多,“尖峰”的数量也会越多。

(A):

(B):

A)IgG在室温下的检测信号;(B)IgG经75℃处理后的检测信号