抗体定量新利器:Valita TITER IgG定量试剂盒

Valita™TITLE是一款高通量,快速简便,成本低,精确度高的蛋白定量方法,能够提高单抗药物的研发效率。

简 介:

单抗开发的最终目标是找到一个稳定、高产和高质量的单抗克隆,所以IgG的定量是单抗开发与生产中各阶段的关键步骤(图1)。

常用的IgG定量方法需要特殊仪器、熟练的人员和耗时的检测,如HPLC、表面干涉法和酶联免疫吸附试验(表1)。在这里,我们介绍Valita™TITER的定量方法,这个实验不到1小时,并可以整合到生物工艺的96孔板。该方法通量高,分析所需样品体积少,操作简单,也不需要昂贵的设备。

特点:

1. 简单:获取和分析数据简单方便

2. 快速:96孔板不到1小时快速出结果

3. 准确:Valita™TITLE IgG精确测定2.5~100 mg/L;

Valita™TITLE Plus IgG精确测定0.02~1.5 g/L

工作流程:

样品的准备按试剂盒说明书进行。标准曲线绘制,每个相对荧光值对应一个IgG标准品。在Valta™TITER微孔板的每个孔中加入缓冲液、标准品或样品。混匀后避光孵育5分钟。然后在有FP功能的多功能酶标仪(滤光片即可)中,采用预置的检测程序进行读数。在分析软件中将获得的Raw Data转化成.csv格式文件,再用Valita™APP软件进行分析。

原 理:

Valita™TITER定量是基于荧光偏振(FP)技术检测IgG与IgG结合肽(ProteinG)的相互作用。96孔板的每一个孔包被荧光标记的ProteinG。当把样品加到孔内,ProteinG重悬并结合样品。ProteinG结合到抗体后,运动变慢, 导致FP值增加。

总  结:

IgG定量必须在细胞系开发过程的多个步骤中进行以保证最终扩大化生产的产品质量,因此一种以尽可能少的时间获得最准确结果的测定方法对成功至关重要。ValitaTITER 实验是一种均相的、高通量的方法,可在细胞系开发工作流程中精确快速的检测 IgG 含量。这种实验的96 孔板检测已在多个品牌具有 FP 功能的读板机上充分验证,结果准确可靠。